1、分离步骤：
①、选种菇：选择优良的种菇作为分离材料，要求外观典型、大小适中、无病虫害、八成熟、1~2茬的子实体。
②、种菇消毒：用无菌水冲洗后，用75%的酒精棉球迅速擦拭表面消毒。
③、取接组织：取消毒过的刀片从菌柄或菌盖中部纵切、撕开，挑取菌盖与菌柄交界处的一小块组织（火柴头大小），接种到PDA斜面培养基中部。
3-5天后，接种块上产生白色绒毛状菌丝。
④、培养：25-28摄氏度培养3-5天后，接种块上产生白色绒毛状菌丝时，在接种箱或净化工作台上，用接种针将菌丝移接到斜面试管内，培养满了即为平菇母种。
２、注意事项：
①、种菇选择大小适中、无病虫害、八成熟、1~2茬的子实体。
②、种菇消毒消毒要彻底。
③、取接组织动作要快，组织块宜小不宜大。
④、培养温度严格控制。