（1）吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 亚硝酸钠标准使用液（5μg/mL）（相当于0.0μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg亚硝酸钠）（至少7个等梯度点），分别置于50mL 带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液（0.4%），混匀，静置3min～5min后各加入1mL盐酸萘乙二胺溶液（0.2%），加水至刻度，混匀，静置15min，用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度。
（2）测量前：分光光度计先要预热30min，比色杯要进行校正。
（3）以亚硝酸盐含量m为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

凯氏定氮测蛋白质含量分为四步：湿法消化、碱化蒸馏、硼酸吸收、盐酸滴定。