1.蛋白质的制备；
2.SDS-PAGE电泳分离样品；
3.将已经分离的蛋白转移到尼龙或其他膜上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
4.用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
5.洗去未结合的一抗，加入酶偶联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射自显影法检测凝胶中的蛋白成分。