打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照： 
对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；       
对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；  
对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；  
对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细
菌细胞涂布在培养平板上。  
     在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA 片段，实验终于获得成功。

打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照： 
对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；       
对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；  
对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；  
对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细
菌细胞涂布在培养平板上。  
     在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA 片段，实验终于获得成功。

打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照： 
对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；       
对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；  
对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；  
对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细
菌细胞涂布在培养平板上。  
     在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA 片段，实验终于获得成功。

λYES（酵母—大肠杆菌穿梭载体）是构建 cDNA 文库的高效载体，这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA 被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。       为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶 XhoI（5’-C十 TCGAG）进行切割，然后在 dTTP 存在的情况下，同 DNA 聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链 cDNA 同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC，它们的 5’端都是磷酸。然后将载体和 cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用 2μg的7载体和 0.1μg 的 cDNA，构建了一个有 4×10 个克隆的 cDNA 文库。

X染色体的失活是一种独特的发育调控机制，它关闭了整个染色体上的所有基因的表达。在人类 X 染色体中，失活作用涉及到 1.5×108 以上的碱基对和几千个基因。在女性中，两条X染色体中的任何一条失活所造成的X连锁基因的表达与正常男性单个X染色体上基因表达的结果是相同的。虽然失活的机理仍不了解，一般认为失活作用是在染色体的特定区域即 X 失活中心开始的，然后扩散到染色体的其他部分。虽然失活染色体上的大多数基因被关闭了，但少数仍有活性，因此，可以推测 X 的失活作用与 X 连锁基因的表达模式有关。为了验证这种推测，分离了大量的人的 X 染色体基因的 cDNA 并用 Northern 印迹法检查它们的表达。比较了这些基因在 X 染色体正常的男性和女性细胞中的表达、在 X 染色体异常的男性和女性个体中的表达、以及在啮齿动物：人细胞杂交株中的表达，这种杂交株保留了一个失活的人的 X染色体（Xi）或是一个有活性的人 X染色体（Xa）。在四种 cDNA 中，发现了三种表达模式，A、B、C 三种 cDNA示于图 4。

四膜虫是一种双核有纤毛的原生动物。小核（微核）含有细胞染色体的主要拷贝，它参与细胞的性接合，而并不在通常的基因表达中起作用。大核（巨核）含有细胞基因组的“工作”拷贝，由大量基因大小的双链 DNA 片段（微染色体）组成，它们活跃地进行着转录。含有核糖体 RNA基因的微染色体拷贝数很多，可以用梯度离心进行分离。在电子显微镜下检查，每一个核糖体微染色体是一种长为 21kb 的线性结构。进行凝胶电泳时，核糖体微染色体的迁移也是 21kb（图 3 的第一泳道）。但是，如果用限制性内切核酸酶BglⅡ切割微染色体，产生的两个片段（13.4kb 和 3.8kb）的总和不等于 21kb（图3的第二泳道），改用其他的限制性内切核酸酶切割，所产生的限制性片段的总和也都小于 21kb，并且不同种酶切割产生的片段总和都不一样。如果把未经切割的微染色体先进行变性和复性处理，然后再进行凝胶电泳，所得到的双链 DNA片段只有 10．5kb（图 3 第三泳道）；与此相似的是，将 BglⅡ切割的微染色体进行变性和复性，电泳后，13．4kb的片段被 6．7kb 的片段所取代 （图 3 第四泳道）。请解释为什么限制性片段的总长度不等于 21kb？为什么变性和复性之后电泳的结果有所改变？对于核糖体微染色体中的总序列组成你有什么看法？