问答题X 纠错
限制性内切核酸酶片段的长度不会达到 21kb，且电泳的方式也会随变性和复性而变化，这是因为核糖体微染色体是一种反向的二聚体或是一种回文结构（图 A22.2）。也就是说，微染色体的左半部分的序列是同右半部分的序列在方向上是反向重复的。因此，一种限制性内切核酸酶是在与末端相同距离的位点切割每一条臂（即每一重复片段），结果产生一个中央片段和两个相同的两侧末端片段。用 BgJn 切割，中央片段是 13.4kb，两侧末端片段各为 3.8kb。凝胶上的各片段之和不到 21kb，应该将末端计算两次，即2×3.8kb＋13.4kb＝21kb
微染色体或其切割后的产物经变性和复性，会改变电泳的结果，这是因为来自中央片段的单链的左右两半是互补的，可以自身复性。由于两个互补的片段是相同的分子，其自身复性比与其他分子间的复性速度要快很多。自身复性将产生的片段的可见长度减少 1／2，因此，将未切割的微染色体进行变性和复性，其大小从 21kb 减少到 10.5kb。
同样， 13.4kb 的中央 BglⅡ片段被减少到 6.7kb。当然，末端单链片段不自身互补，只能与其他的互补片段重新形成它们通常的双链结构。出乎意料的是，四膜虫核糖体基因存在于一个小核的染色体中，大小只有构成大核微型染色体反向重复序列的一半。因为接合后小核产生新大核，所以核糖体基因必须从染色体中切割出来，切出的方式必须是能够特异性地形成反向二聚体。
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用 BamHI切割一重组质粒 DNA 分子并从中分离纯化了两个 DNA片段，一段长400bp，另一段长 900bp。现在希望将这两个片段重新连接起来，得到如图 1 所示的结果。
于是将这两种片段混合起来，并在连接酶的存在下进行温育，分别在 30 分钟和 8 小时取样进行凝胶电泳分析，令人惊讶的是，连接产物并非是理想中的 1．3kb的重组分子，而是一种复杂的片段模式（图 A）。同时发现随着温育时间的延长，较小片段的浓度逐渐降低，大片段的浓度逐渐增加。如果用 BamHI来切割连接后的混合物，则起始的片段可以重新产生（图 A）。
从凝胶中分离纯化出 1．3kb 的片段，并取出一部分用 BamHI进行切割，以检查它的结构。正如预料的一样，出现了两个原始的带（图 B）。但是用 EcoRI切割另一部分样品，希望能够产生两个 300bp 和一个长度为 700bp 的核苷酸片段，然而，凝胶电泳的结果，令人惊奇（图 B）。
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