为什么用 EcoRI切割纯化的 1.3kb 连...

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用 BamHI切割一重组质粒 DNA 分子并从中分离纯化了两个 DNA片段，一段长400bp，另一段长 900bp。现在希望将这两个片段重新连接起来，得到如图 1 所示的结果。
于是将这两种片段混合起来，并在连接酶的存在下进行温育，分别在 30 分钟和 8 小时取样进行凝胶电泳分析，令人惊讶的是，连接产物并非是理想中的 1．3kb的重组分子，而是一种复杂的片段模式（图 A）。同时发现随着温育时间的延长，较小片段的浓度逐渐降低，大片段的浓度逐渐增加。如果用 BamHI来切割连接后的混合物，则起始的片段可以重新产生（图 A）。
从凝胶中分离纯化出 1．3kb 的片段，并取出一部分用 BamHI进行切割，以检查它的结构。正如预料的一样，出现了两个原始的带（图 B）。但是用 EcoRI切割另一部分样品，希望能够产生两个 300bp 和一个长度为 700bp 的核苷酸片段，然而，凝胶电泳的结果，令人惊奇（图 B）。

为什么用 EcoRI切割纯化的 1.3kb 连接物会产生那么多的片段？

参考答案：
由于任意两个 BamHI末端可以连接，甚至同一大小的片段也有几种不同的结构(如图A22．1 中的1.3kb 片段)；所以用 EcoRI来切割 1.3kb 片段的群体，可以产生各种不同大小的片段，范围可从 0.1kb(图 A22．1 中结构3和 4 的左端)到1.0kb(图A22．1的结构4中的内部片段)。

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用 BamHI切割一重组质粒 DNA 分子并从中分离纯化了两个 DNA片段，一段长400bp，另一段长 900bp。现在希望将这两个片段重新连接起来，得到如图 1 所示的结果。
于是将这两种片段混合起来，并在连接酶的存在下进行温育，分别在 30 分钟和 8 小时取样进行凝胶电泳分析，令人惊讶的是，连接产物并非是理想中的 1．3kb的重组分子，而是一种复杂的片段模式（图 A）。同时发现随着温育时间的延长，较小片段的浓度逐渐降低，大片段的浓度逐渐增加。如果用 BamHI来切割连接后的混合物，则起始的片段可以重新产生（图 A）。
从凝胶中分离纯化出 1．3kb 的片段，并取出一部分用 BamHI进行切割，以检查它的结构。正如预料的一样，出现了两个原始的带（图 B）。但是用 EcoRI切割另一部分样品，希望能够产生两个 300bp 和一个长度为 700bp 的核苷酸片段，然而，凝胶电泳的结果，令人惊奇（图 B）。

在原始连接混合物中为什么有如此多的带？

参考答案：由于任意两个 BamHI位点都可以连接在一起，产生的连接产物就很复杂。因此， 0.4kb的片段连接在一起可以产生诸如 0...

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如何以大肠杆菌质粒 DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆菌中进行表达？简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。

参考答案：要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达，通常遇到的问题有：（1）细菌的 RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子。（2）大...

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