要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达，通常遇到的问题有：
（1）细菌的 RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子。
（2）大多数真核基因有内含子，这些内含子在转录后从前体 mRNA 中被切除而形成熟 mRNA。细菌细胞没有这样的机制来去除内含子。
（3）有些真核生物的蛋白质是通过前体分子加工而来的，例如胰岛素就是通过加工去除前体分子内部的 33个氨基酸残基而来，剩下的两段肽链分别形成胰岛素的α、β链。
（4）产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解。针对上述可能出现的问题，建议在克隆的过程中采取以下措施：
①应将激素的编码序列置于含有核糖体结合位点和起始密码子 ATG的细菌强启动子的附近（含有这种序列的载体称表达载体）。
②可以以激素的 mRNA为模板用反转录酶合成激素的基因。
这种 DNA不含内含子可插入到载体中进行克隆。此外，如果蛋白质序列短则可通过化学合成得到该基因。合成的基因应含起始密码 ATG、通过该激素蛋白的氨基酸序列推测而来的编码序列，以及 1～2 个终止密码：
A.TG———————编码序列——————TGA  TAG
现在，这个合成基因可被插入载体中。
③有时加工过程可以在离体条件下进行。如果加工有困难，可以用合成基因，从而免除加工过程。
④选用合适的突变型宿主从而防止蛋白酶水解。如果用酵母作为宿主上述许多问题都可以较容易地解决，尤其是现在有既能在大肠杆菌中又能在酵母中复制的穿梭质粒载体。
说明：
1）ATG，TAG和TGA是对应mRNA中的转录起始信号AUG和终止信号UAG，UGA 的DNA序列。
2）克隆生长素释放抑制因子基因时采用化学合成基因的方法。生长素释放抑制因子是一种由下丘脑分泌的激素，长14个氨基酸残基，因此人工合成的基因，包括在宿主菌中表达所需的转录的起始和终止信号，仅51bp长。