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参考答案:

M.13 克隆系统具有很多优点:
(1)克隆的片段大:M13 噬菌体的 DNA在包装时不受体积的限制,所以容载能力大,有报道,有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体 DNA 长 6~7 倍的DNA(插入片段可达 40kb)。
(2)可直接产生单链 DNA,这对于 DNA测序、DNA诱变、制备特异的单链 DNA探针都是十分有用的。
(3)单链 DNA和双链 DNA都可以转染宿主,并可根据人工加上的选择标记进行筛选。
M.13 克隆系列的不足:
(1)较大的外源片段插入后,在扩增过程中往往不够稳定,一般说,克隆的片段越大,发生丢失的机率越大。
(2)单链载体分子感染的细胞中,往往是单链和双链混杂,分离双链比较麻烦。

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参考答案:

(1)削减分子量(除去非必需区和整合区);
(2)削减酶切位点;
(3)添加选择标记;
(4)引入终止突变。

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