参考答案：用识别4个碱基的限制酶HaeⅢ切割 M13双链 DNA，发现HaeⅢ在M13上有10个切点。为了将M13构建成克隆载体，首先用HaeⅢ将RFl进行部分消化，使之产生单一切点的全长的线性 M13DNA。HaeⅢ在M13上有10 个切点，因此产生的线性DNA的末端可能是这10个切点的任何一个部位产生的。将外源 DNA同线性的M13DNA连接起来，只有在非必需区插入并连接起来的重组体能够进行复制，从必需区插入的重组 DNA不能复制，因此将会被丢失。根据上述的原理，用 HaeⅢ部分酶切野生型的RFMl3DNA,然后同lac插人片段连接，感染后筛选重组体M13mpl，该重组体中的插入片段是从IG区的5868位的HaeⅢ位点插入的。通过对lac插入片段的序列分析发现，只要将β半乳糖苷酶基因内的密码子 5 的碱基 G换成A即可产生一个 EcoRI的识别位点(G↓AATTC)。因为知道G中的06甲基化将会导致G同U的配对，将单链的M13mpl 的(+)链用甲基化试剂N—甲基—N—亚硝酸脲进行处理，用突变的DNA去转染细菌，分离 RF型DNA，由于分离的RF DNA并非都具有EcoRI位点的突变体，所以用EcoRI切割后，通过琼脂糖凝胶电泳进行检查，根据线性 DNA 与环状DNA的电泳迁移率的不同，将线性化的DNA分离出来，重新连接成环，再进行转染。分离到三个克隆，每个克隆都有一个EcoRI的位点，但所在位置有所不同，将它们分别命名为：M13mp2、M13mp3、M13mp4。
