DNaseI是一种内切核酸酶，在 Mg²⁺存在下，DNaseI随机切割 DNA两条链中的任意一条链；当 Mn²⁺代替Mg²⁺ 时，DNaseI几乎是在双链 DNA 两条链相对的位置上打开缺口，使双链 DNA 断裂，产生的末端几乎是平末端或只突出 1~2 个核苷酸的 DNA 片段。
DNaseI有许多用途：（1）在切口移位标记中，制造切口；
（2）在足迹法中保护 DNA；
（3）除去 RNA 制备物中的 DNA；
（4）体外转录中除去 DNA 模板；
（5）检测染色体中的转录活性区；
（6）产生可在噬菌体 M13 载体上进行测序的随机克隆。