K.lenow酶是1974年 Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解 DNA聚合酶 I，得到两个片段，其中大片段的分子量为 75kDa，它具有 5’→ 3’聚合酶和 3’→ 5’外切核酸酶的活性，小片段具有 5’→ 3’外切核酸酶活性。由于大片段失去了 DNA聚合酶 I中会降解 5’引物的 5’→ 3’外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。 Klenow酶主要有下列用途：
（1）修复反应，制备平末端可用 Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其分方法产生的 5’或 3’突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的 DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3’末端标记的探针。用 Klenow 酶修复 5’突出末端的反应主要是利用了 Klenow 酶的 DNA聚合酶活性，是填补反应；而修复 3’突出末端则是用 Klenow酶的 3’→ 5’外切核酸酶的活性，是切割反应。用 Klenow酶的切割反应来修复 3’突出末端是不理想的，改用 T4DNA 聚合酶或其他的酶是更好的选择。
（2）标记 DNA3’突出末端（protmding end）该反应分两步进行：先用 3’→ 5’的外切核酸酶活性除去 3’突出末端，产生 3’隐含末端，然后在高浓度的标记底物（α～³²p_dNTP）存在下，使降解（3’→ 5’）作用与聚合（5’→ 3’）作用达到平衡。这种反应也叫交换或取代反应（exchange／replacem—entreaction）。不过这一反应用 T4DNA 聚合酶的效果更好，因它的 3’→ 5’外切核酸酶活性较强。
（3）其他的一些用途：包括用双脱氧末端终止法进行 DNA序列分析、用于 cDNA第二链的合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法（primer extension）制备单链 DNA探针等。

应注意Mg²⁺离子浓度和处理时间及温度。

 因为 BAP耐热和耐酚抽提。

S1 核酸酶作图是一种对 RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法。