问答题X 纠错
亲和层析的洗脱过程:
(1)样品上柱后分离目的物先紧密地吸附在亲和柱上,迅速用平衡缓冲液洗涤时层谱上出现第一个杂蛋白的峰。
(2)继续用大量平衡缓冲液充分洗涤,必要时用不同缓冲液洗涤,以除去非专一吸附的杂质,使柱上只留下专一吸附的目的物。
(3)然后改变缓冲液,要求选择能减弱纯化目的物与亲和吸附剂之间吸附力的条件,使络合物解离洗出,图谱上出现第二个峰。
(4)一般洗脱方法是改变缓冲液的pH,改变离子强度或同时改变两者.洗脱蛋白质大多数用0.1mol/L稀醋酸或0.01tool/L稀盐酸,如果目的物要被酸破坏,可试用0.1mol几氢氧化铵洗脱。
(5)蛋白质洗出后应立刻中和、稀释、透析、重折叠为天然结构恢复蛋白质活力。
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