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问答题
我们实验室研究生做了一个如下的实验：将pdc基因（丙酮酸脱羧酶）克隆到pUC18载体中，以便在E.coli TOP10中表达，这个pdc基因两侧具有BamHI的位点，因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行：载体用BamHI切割后，立即用碱性磷酸酶处理，接着将处理过的载体同用BamHI切割的pdc基因混合，加入T4连接酶进行温育，连接后，将DNA同处理过的可以接受外源DNA的E.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基的平板上。
实验中同时设置了4个对照：
对照1：将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2：将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照3：将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照4：将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（见下表1）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没菌落生长（见下表1）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（见下表1）。从实验平板上挑出12个菌落，分离质粒DNA，并用BamHI进行切割，其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样的单一的一条带，另3个克隆中切出一个pdc基因，实验终于获得成功。
问答题
我们实验室研究生做了一个如下的实验：将pdc基因（丙酮酸脱羧酶）克隆到pUC18载体中，以便在E.coli TOP10中表达，这个pdc基因两侧具有BamHI的位点，因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行：载体用BamHI切割后，立即用碱性磷酸酶处理，接着将处理过的载体同用BamHI切割的pdc基因混合，加入T4连接酶进行温育，连接后，将DNA同处理过的可以接受外源DNA的E.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基的平板上。
实验中同时设置了4个对照：
对照1：将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2：将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照3：将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照4：将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（见下表1）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没菌落生长（见下表1）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（见下表1）。从实验平板上挑出12个菌落，分离质粒DNA，并用BamHI进行切割，其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样的单一的一条带，另3个克隆中切出一个pdc基因，实验终于获得成功。
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我们实验室研究生做了一个如下的实验：将pdc基因（丙酮酸脱羧酶）克隆到pUC18载体中，以便在E.coli TOP10中表达，这个pdc基因两侧具有BamHI的位点，因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行：载体用BamHI切割后，立即用碱性磷酸酶处理，接着将处理过的载体同用BamHI切割的pdc基因混合，加入T4连接酶进行温育，连接后，将DNA同处理过的可以接受外源DNA的E.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基的平板上。
实验中同时设置了4个对照：
对照1：将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2：将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照3：将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照4：将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（见下表1）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没菌落生长（见下表1）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（见下表1）。从实验平板上挑出12个菌落，分离质粒DNA，并用BamHI进行切割，其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样的单一的一条带，另3个克隆中切出一个pdc基因，实验终于获得成功。
