（1）控制P-D轴发育的信号中心是的顶外胚层嵴（AER），在鸟类和哺乳类中胚层诱导其外侧的外胚层细胞伸长形成的突起结构，AER产生FGF因子分泌到并分泌到间质细胞群之下，刺激间质细胞分裂增殖形成渐进带。
（2）在年幼肢芽和体壁后部连接处的一小团中胚层细胞这团细胞称为极化活动区（ZPA），由ZPA组织分泌的一种可扩散形态发生因子，决定附肢前后（A-P）轴线。Sonic Hedgehog（shh）具有ZPA活性。
（3）肢体D-V轴线的确定。在背部外胚层特异性表达的Wnt-7a诱导背部间质细胞合成转录因子Lmx-1，后者再控制肢芽背部特异性基因的表达。engrailed在肢芽腹部外胚层表达。