原理：高浓度盐溶液中，亲水性较强的物质，分子内部的疏水基团外露，便可与疏水的固定相以疏水作用力相结合（吸附）。由于这种作用力大小不同，可以通过改变极性流动相的离子强度（由高到低）使其依次解吸附。即高浓度的盐溶液可将吸附力弱（小）（极性大）的物质先洗脱下来，而低浓度的盐则使吸附力强（大）（极性小）的物质被后洗脱下来。
注意：只有对极性很强的物质，才需在流动相中添加有机溶剂，以降低极性，使其解吸附。此时，须注意防止有效成分变性。
操作：
1.色谱柱和吸附剂的选择色谱柱规格：类似普通色谱。当被分离样品量较大时、被分离物与杂质间的疏水性差异较大时，选用体积较大的柱子（h：d≤3）。固定相选择：根据要分离物质的特点，结合吸附剂的性能进行选择。
2.装柱先将吸附剂悬浮于乙醇溶液中→浸泡离心→弃上清，收沉淀→50%（m/V）浓度悬浮于样品缓冲溶液中装柱（同常规）。
3.加样：样品预处理：补加盐→混匀→放置（片刻）上柱→吸附（0.5～1h）。
4.洗脱：平衡液洗涤浓度由高→低。即先用高离子强度的平衡液洗涤，再用低离子强度的平衡液洗脱。同时，收集和检测。
5.柱再生：用8mol/L的脲素溶液（或其缓冲溶液）洗涤（除杂）→平衡缓冲液平衡。