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参考答案:

原理:高浓度盐溶液中,亲水性较强的物质,分子内部的疏水基团外露,便可与疏水的固定相以疏水作用力相结合(吸附)。由于这种作用力大小不同,可以通过改变极性流动相的离子强度(由高到低)使其依次解吸附。即高浓度的盐溶液可将吸附力弱(小)(极性大)的物质先洗脱下来,而低浓度的盐则使吸附力强(大)(极性小)的物质被后洗脱下来。
注意:只有对极性很强的物质,才需在流动相中添加有机溶剂,以降低极性,使其解吸附。此时,须注意防止有效成分变性。
操作:
1.色谱柱和吸附剂的选择色谱柱规格:类似普通色谱。当被分离样品量较大时、被分离物与杂质间的疏水性差异较大时,选用体积较大的柱子(h:d≤3)。固定相选择:根据要分离物质的特点,结合吸附剂的性能进行选择。
2.装柱先将吸附剂悬浮于乙醇溶液中→浸泡离心→弃上清,收沉淀→50%(m/V)浓度悬浮于样品缓冲溶液中装柱(同常规)。
3.加样:样品预处理:补加盐→混匀→放置(片刻)上柱→吸附(0.5~1h)。
4.洗脱:平衡液洗涤浓度由高→低。即先用高离子强度的平衡液洗涤,再用低离子强度的平衡液洗脱。同时,收集和检测。
5.柱再生:用8mol/L的脲素溶液(或其缓冲溶液)洗涤(除杂)→平衡缓冲液平衡。

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