①机械分离法：能避免酶制剂对原生质体的破坏作用，但产量少；
②酶解分离法。

①控制杂种分离，缩短育种周期；
②提高常规育种的选择效率；
③单倍体是诱变育种的良好材料。

①基因型；
②供体植株的生理状况；
③花粉的发育时期；
④材料的预处理和预培养；
⑤培养基；
⑥培养方式；
⑦培养条件。