将外源DNA用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA上。

在PCR反应中，与待扩增的DNA两侧碱基互补的寡核苷酸片段，其本质是单链DNA。

当限制酶从识别序列的中心轴西线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。