精斑的确证检验方法主要有：
（1）形态学检验：精斑中的精子比较稳定，可存留很长时间。用生理盐水浸泡检材，使精子从附着物上脱离下来，经离心沉淀涂片，用各种染色方法使精子着色，在显微镜下观察，根据精子的特殊形态识别。由于人类精子形态与动物精子形态有明显差异，故同时也可确定种属。本法操作简便，省时。但在浸泡检材过程中，有时会使精子头尾分离，难以辩认，易与植物细胞、阴道滴虫、酵母菌等混淆。此外，输精管结扎者或精子缺乏症患者的精液中无精子，使精子检出法受到限制。检材保存不当、腐败等精子已破坏，也查不到精子。
（2）免疫学检验：精液沉淀反应是用人精液注射到家兔体内，通过免疫途径获得抗人精液血清。然后用特异性抗人精血清与检材浸出液作沉淀反应，出现白色沉淀线者为阳性，说明检材中含有精（液）斑。其方法同血痕种属试验。抗人精血清不仅有脏器特异性，而且有种属特异性，不与动物精液发生阳性反应，故本法也可作为精斑的种属试验。精浆特异性蛋白P30的检测。人精浆中存在一种特异的糖蛋白，来源于前列腺，其分子量为30kd，因而称为P30蛋白。用纯化的P30蛋白免疫动物获得抗P30蛋白血清，进行免疫扩散试验与各种动物精液及血清，人类各种体液、分泌液、组织器官浸液均无交叉反应，具有良好的种属特异性和器官特异性，可用于确证人类精斑，不受有无精子的影响，是目前确证精（液）斑最好的方法。
（3）生物化学检验：生物化学检验方法主要是通过电泳检测精液中特异的酶来确证人类精斑。例如乳酸脱氢酶X（LDH-X）检测。尽管人类精液、心、肝等浸出液均可检出乳酸脱氢酶的同功酶1至5型，但LDH-X则是精子所特有的，可作为精（液）斑确证试验方法之一。一般采用电泳法和组织化学法检测LDH-X。由于输精管结扎者或患缺乏精子症者的精液中不能检出LDH-X，故其使用受限。