定义：一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记、可在两种不同的宿主细胞中存活和复制的质粒载体。如：大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒载体、大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒载体、大肠杆菌-土壤农杆菌穿梭质粒载体（植物转化载体）、大肠杆菌-动物细胞穿梭质粒载体。pHT304是应用于苏云金芽胞杆菌的穿梭载体。