同位素示踪技术确定了分泌的路线，从内质网开始经高尔基体运向细胞外；分离技术确定了参与合成和分泌的主要细胞器的作用：内质网是参与蛋白质合成和转运的，高尔基体不仅是中转站，而且具有加工的作用。突变体研究揭示了分泌活动的相关基因及分泌的机理。

在叶绿体基质中进行的，利用光反应生成的ATP和NADPH的能量，固定CO₂生成糖类，该反应不需要光的参与。