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(1)细胞周期同步化的概念:
细胞周期同步化是指在自然或者实验条件下,使一个细胞群体中所有细胞都处于细胞周期的同一时相的过程。
(2)细胞周期同步化的方法:
①天然同步化。
黏菌变形体只进行核分裂而不进行细胞质分裂,结果形成多核原生质体结构,进行多次核分裂后,再进行同步细胞分裂;此外大多数无脊椎动物和个别脊椎动物的早期胚胎细胞,可同步化卵裂形成同步化细胞群体。
②人工同步化。
A.
人工选择同步化:
人工选择同步化指人为地将处于周期不同时相的细胞分离开来,从而获得不同时相的细胞群体。在体外进行细胞培养时,处于M期的细胞体积较大,会变成球形,附着力减弱,经振荡后可从培养液中收集。
B.
人工诱导同步化:
第一,DNA合成阻断法:采用低毒或无毒的DNA合成抑制剂特异地抑制DNA合成,而不影响处于其他时相的细胞进行细胞周期运转,经过两次DNA合成抑制剂处理,细胞最终停止在G1/S期交界处狭窄的时间区段,抑制剂去除后,细胞即可以进行同步细胞周期运转。常用的DNA合成抑制剂有TdR、羟基脲(HU)。
第二,分裂中期阻断法:某些药物可以抑制微管聚合,因而能有效地抑制细胞纺锤体的形成,将细胞阻断在细胞分裂中期。常用药物有秋水仙素、秋水酰胺和诺考达唑。
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简述用放射性同位素3H-TdR(氚胸腺嘧啶)标记法来测定细胞周期长短的原理。假如一种体外培养的非同步生长细胞,它的细胞周期G1期是6小时,S期是6小时,G2期是5小时,M期是1小时,如果用3H-TdR标记细胞15分钟后,立即洗去3H-TdR,然后放置在新鲜培养基中继续培养。请问:
(1)用3H-TdR标记15分钟后,这时被标记的细胞占细胞总数的百分比是多少?
(2)用3H-TdR标记15分钟后,洗净后放置在新鲜培养基中培养18小时,这时被标记的M期细胞又占多少比例?
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