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参考答案:

(一)显微注射法
(1)利用注射仪把外源DNA直接注入动物卵母细胞、受精卵、早期胚胎、胚胎干细胞、或体细胞的转基因方法。
(2)优点:可准确导入外源基因,转化频率高,鱼体内可达20%,不需载体,直接获得纯系,实验时间短。
(3)缺点:仪器贵重,操作繁琐耗时,一次处理卵很少。
(二)电穿孔转化法
(1)利用高压电脉冲作用,使细胞膜上产生可逆的瞬间通道,从而促进外源DNA的有效导入。电穿孔转化法的效率受电场强度、电脉冲时间和外源DNA浓度等参数的影响。
(2)优点:操作简单,同时处理大量受精卵。
(3)缺点:导入是随机的、无定向的,转移率低。
(三)精子介导法
(1)精子同外源DNA共浴后再给卵子受精,使外源DNA通过受精过程进入受精卵并整合于受体的基因组中。
(2)优点:简便,成本低,便于大量筛选,是近几年转基因动物研究的热点。
(3)缺点:处理后精子的受精能力差异较大、阳性率低、转移不稳定。
(四)基因枪转化法
(1)又称微弹轰击转化法,以高压气体为动力,利用高速运行的金属颗粒轰击细胞,将包裹在金属颗粒表面的外源DNA分子随金属颗粒送入细胞的转化方法。
(2)优点:该法简单快速,接触面积大、转化率高,可同时处理多个个体。
(3)缺点:不稳定,表达方面存在问题。
(五)病毒(噬菌体)颗粒转导法
用病毒(噬菌体)DNA(或RT-DNA)构建的克隆载体或携带目的基因的克隆体,在体外包装成病毒(噬菌体)颗粒后,感染受体细胞,使其携带的重组DNA进入受体细胞。
转基因病毒具严格的宿主特异性,且鱼类转基因病毒的分析手段非常落后,此法对鱼类暂不适应。
(六)组织注射法
将外源基因直接向机体组织注射,周围组织能将外源基因纳入,并且注入的外源基因能被整合。

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