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参考答案:

第一方面:转基因鱼研究背景
随着人口的膨胀及渔业捕捞技术的日益精进,水产经济生物的种类和数量急剧下降,因此,对珍稀物种的保护及种群扩增已经迫在眉睫培育或创造特殊经济性状,也需要相应的技术解决,转基因技术可以在一定程度上解决这些问题。
第二方面:转基因鱼的构建
1)获得目的基因:首先从基因文库中得到一个含侧翼调控序列的合适的目的基因,该序列包括位于基因编码序列上游的启动子及位于编码序列上游的组织特异性增强子
2)基因克隆:获得的基因序列必须克隆到质粒或噬菌体中,并在合适的菌株中扩增,然后从培养的细菌(多为大肠杆菌)中提取重组质粒或噬菌体DNA,用合适的限制性内切酶分离出插入载体的外源基因序列,再经过电泳分析,确定分离的DNA片段分子量,以证实所分离的序列是需要的基因片段。
3)受精卵的获得:在繁殖季节,采集精子和卵子,人工受精后,出去卵膜,将裸卵移到郝氏培养液中。
4)基因转移:有显微注射法、精子携带法等。
5)注射后鱼卵的处理:鱼卵孵化后,需要取部分幼鱼作为样品以提取DNA;另一部分继续饲养;同时还要设置对照组,以作比较研究。
第三方面:转基因在水产育种中的应用价值
1)改变受体的代谢特征:
转基因的表达往往对受体鱼的代谢产生重要影响,如加快生长速度,促进性成熟,缩短繁殖周期、调节能量收支等
目前,使用较多的生长激素基因(GH),GH可以在受体鱼中整合和表达,促进个体的生长;
2)改变受体鱼的环境适应能力:
利用大洋条鳕的抗冻蛋白基因开发转基因鲫鱼,试图培育其鲫鱼对低水温的适应性,以扩大鲫鱼的养殖范围合规模,提高渔业生产水平。
3)增强鱼体的抗病能力:
在北美洲西北部,传染性造血坏死病毒(IHNV)曾引起大鳞大马哈鱼(Oncorhynchustschawytscha)和定居河鲑(O.mykiss)大批死亡;IHNV糖蛋白可诱导鱼类产生一种中性抗体,对IHNV有一定的抗病作用,因此,利用IHNV外壳蛋白基因转移培育抗IHNV病毒的鲑鳟鱼品系。
4)环境检测
美国研究人员将萤火虫基因注入斑马鱼的体内,以测试水质污染。如水体中含有聚氯联苯等致癌物质,斑马鱼就会发光。
5)增加观赏性
2003年11月转入了红色荧光蛋白基因的斑马鱼体呈艳红色,在美国得克萨斯州上市。
6)开发生物医药制品
第四方面:转基因鱼的研制和开发中还存在的问题
1)外源基因的整合率较低:外源基因导入到受体鱼中后,与受体基因组的组合至今还不能为人所调控,而是随机的整合整合率较低,一般不超过10%;
2)外源基因表达的效果较差:在外源基因发生整合的鱼中,能表达出外源基因产物的比例也不高
3)安全问题:
A.食用安全:安全和健康第一;而转基因生物是否会对人类造成危害(生理、遗传)还不能下定论;
B.生态安全:转基因物种的引入不应该干扰生态系统的结构和演替进程,不破坏水生生态系统的生物多样性和遗传稳定性;
C.基因操作过程安全性:如克隆载体的来源、特性、安全性;不同的基因转移方法是否会引起基因突变等等问题。

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