①PCR扩增。
优点：简便快速，高效，数kb单基因克隆。
缺点：DNA聚合酶活性和保真性限制。（94℃变性→55℃退火→72℃延伸→94℃变性……）
②文库筛选。
优点：长片段，无碱基错误，位置序列基因克隆。
缺点：繁琐，过程复杂，耗时，昂贵。
③化学合成：简便，准确，已知序列基因克隆，引物合成。
缺点：受合成仪性能限制，长度很短。