问答题
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如何分离微生物的各种亚细胞结构,其原理是什么?
参考答案:
亚细胞结构的分离
采用离心法,自细胞破碎液中分离不同的亚细胞结构 利用颗粒大小的不同
1) 差速离心(differential centrifugation):
用于分离大小、形状显著不同的组分,根据颗粒沉降速度不同得以分离,可将形状、大小不同的颗粒,在不同的离心力下分开
将细胞裂解液先在低速下离心一定时间,大颗粒沉下,中、小颗粒悬浮在上清液中;
将上清液在加高转速的情况下离心,得到中等颗粒的沉淀,小颗粒仍悬浮在上清液中;
再加高转速离心小颗粒也沉出;
逐步加高转速离心,可将具有不同沉降速度的各种亚细胞结构的颗粒分开。
3000-5000×g离心5-10min,可沉下细菌细胞;
20000-50000×g离心20min,可沉下细胞壁碎片和较大的膜结构;
200000×g离心 lh可沉下小的膜泡囊或核蛋白体。
2) 区带离心(zonal centrifugation)
速度区带离心法:用于分离大小差别不显著的组分
采用的介质是不同浓度梯度的蔗糖溶液,可防止离心时形成上下对流,因此在一次高速离心下,可将颗粒大小不同的物质,按沉降速度不同分成一些区带,颗粒大小相同的物质会聚集成一区带。
利用颗粒密度的不同
3) 平衡密度梯度离心(equilibrium density gradient centrifugation)
按细胞组分的浮力密度不同进行分离的方法。适用于大小、形态相似而密度不同的组分。
用于分离各种膜结构。因为来自同一种膜的碎片,在形状、大小上可能相差很大,但它们的密度是相同的。
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