第一步发酵：黑醋酸菌或弱氧醋酸杆菌以D-山梨醇为原料，将其转化为L-山梨糖；
黑醋酸菌以山梨醇微原料，将其转化为山梨糖，以酵母膏为氮源，加碳酸钙并调节PH4.8-5.0，原菌在斜面培养基上活化，转入三角瓶，在30℃培养48h为第一代，以后每隔24h传一代，10代后发酵率>50％，即可扩种到克氏瓶，克氏瓶用于扩培种液和生产。培养基：山梨醇、酵母膏、碳酸钙、玉米浆、甘油聚醚、苯多生钙、维生素B1、维生素B2、烟碱胺、冰醋酸等。
第二步发酵：假单胞菌或芽孢杆菌（大菌）和氧化葡萄糖酸菌（小菌）将L-山梨糖转化为ɑ-酮基-L-古龙酸。ɑ-酮基-L-古龙酸是合成维生素C的前体。
二步发酵菌种采用混合菌种，由一株产酸“小菌”氧化葡萄糖酸菌和另一株伴生“大菌”假单胞菌或芽孢杆菌搭配组合而成。只有两株细菌混合培养发酵，才能正常产酸。国内工厂使用混合菌株往往习惯用“大菌”来命名。
培养基中加入玉米浆、尿素、碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、甘油醚等。
茄子瓶29℃培养2－3天，转入种液瓶振荡培养17－20h，接入发酵瓶。
培养基灭菌：实罐灭菌，118－120℃，罐压0.1MPa，30分钟。
（也可）连消塔和维持罐连续灭菌，连消塔125－130℃，0.15-0.2MPa，维持罐0.2MPa，维持1h，打料速度250L/min。
发酵液在沉淀罐中沉降3h，上清液经离子交换，活性炭脱色、离心、浓缩、结晶、干燥，制得古龙酸干品。
将古龙酸干品经酯化、转化反应得到维生素C－Na、再经酸化后得到维生素C，经浓缩结晶分离即可得到维生素C粗品。粗品经溶解、脱色、冷却结晶、真空干燥等得到合格维生素C精品。