（1）紫外线杀灭微生物的作用机理：具有灭菌波长的紫外线主要作用于DNA，照射后能导致微生物体内的1条DNA链上邻近的两个胸腺嘧啶分子间形成胸腺嘧啶二聚体，这种二聚体成为一种特殊的连接，使微生物DNA失去转化能力而死亡。
（2）影响紫外线消毒效果的因素：
①照射剂量：用紫外线消毒必须达到所需照射的剂量，照射剂量与消毒效果呈正相关。
②微生物的种类和数量：不同微生物对紫外线的敏感性不同，对紫外线照射抵抗力的强度依次为细菌、芽胞、抗酸杆菌、病毒和其他细菌繁殖体。微生物的数量越多，消毒所需照射剂量也越大。因此，消毒污染严重的物品需要加大照射剂量。
③微生物的生长期或芽胞生长期：细菌繁殖体在对数生长早期，对紫外线最敏感，随生长期的延续，抵抗力逐渐加强，到稳定期增至最强，随后抵抗力减弱。细菌芽胞在其发芽过程中的某一阶段对紫外线最不敏感，随后敏感性增加，最后变成比静止期还要敏感。
④温度与湿度：大多数微生物（耐辐射球菌除外）在低温时对紫外线辐射敏感。但环境温度在5～37℃时，对紫外线杀菌效果影响不大。环境温度对紫外线灯输出强度有影响，一般以室温条件（27～40℃）输出强度最大，室温高于或低于此温度时，紫外线输出强度下降。紫外线杀灭微生物效果最好的相对湿度为40％～60％，湿度超过70％，紫外线对微生物的杀灭率就会急剧下降，湿度超过80％又会产生激活作用。
⑤有机物：有机物的存在会明显影响紫外线的消毒效果，蛋白、血液、牛奶等的存在可增加微生物对紫外线的抗力，因此当物体表面被血液或一些分泌物污染时，应彻底清洁后再行紫外线消毒。
⑥穿透力和反射：紫外线是一种低能量的电磁辐射，穿透力极弱，只能杀灭直接照射的微生物，灰尘、纸张、玻璃、有机物等均能影响紫外线的穿透力，从而影响紫外线的杀菌效能。而不同的物质表面对紫外线的反射程度差异明显。例如铝金属和铝涂料都有良好的反射物质，能使照射剂量增强40％～80％。