（1）HPLC在体内药物分析方法中的应用
由于体液中药物及代谢产物含量极微，又与大量内源性成分相混杂，因此，只有分析方法可靠才能保证分析结果准确。近年来，高效液相色谱法（HPLC）以适用范围广、分离效率高、组分易回收及快速简便为特点，伴以灵敏度高、选择性强的检测器的开发和应用，在诸多的分析方法中后来居上，成为分析体内药物和代谢产物的不可缺少的手段之一。
HPLC对生物样品的分析主要包括以下几个步骤：
①生物样品前处理
为了去除内源性成分的干扰，保证色谱柱的柱效和寿命，进行生物样品的前处理是极其重要的。
首先，去除蛋白质。常用的蛋白质沉淀剂包括有机溶剂、碳酸铵盐、无机酸和重金属盐。其次，从生物样品中提取待测物通常有液相提取和固相提取两种，分析超微量化合物时尤为必要。液相提取常用的有机溶剂有：正醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、苯及正己烷等等以及它们的混合溶液。为了有效地提取酸、碱性药物，通常需要调节样品的pH，碱性药物一般调至高于其pKa12个单位，酸性药物则调至低于其pKa12个单位，使药物处于非解离状态而易被提取。提取高度电离的化合物（如季铵盐或磺酸盐）以及两性化合物（如氨基酸）时，则须加入离子对试制。经典的固相提取剂有氧化铝、活性炭及硅藻土等。用各种HPLC柱填料制备的固相提取柱，不仅再现性好、回收率高，而且可以选用多种洗涤剂和洗脱剂，因而有较高的选择性。
②生物样品直接进样
为了节约时间、提高样品回收率并保证分析的准确性，生物样品直接进样的方法已被广泛研究，主要有加预柱、柱切换、使用内表面反向填充剂或大孔径填充剂的分析柱及使用含表面活性剂的流动相。
③分离和检测系统的选择
首先，通常根据待测物的理化性质选择分离系统。极性较强的组分一般选用反相色谱柱，流动相为水或缓冲溶液与甲醇、乙腈或四氢呋喃等的混合溶液。当分离结构极为相似的化合物时，还常常需要适当调节流动相的pH 以及使用两种以上的有机溶剂。分离脂溶性化合物是，首选正相色谱，流动相常为正己烷、苯、乙酸乙酯或氯仿等混合溶液。离子交换柱则用于一些强酸、强碱性化合物的分离，流动相为适当浓度的碱性水溶液。由于药物及代谢产物大多具有一定的极性，因此反相色谱应用最广，其中C18键合柱最常用。
其次，根据测定对象的理化性质选择检测系统。首先选择高灵敏的直接检测法。当待测物可以用多种方法检测时，一般选用灵敏度高、选择性强的检测法。当待测组分对各种检测法都缺乏足够的响应或在检测条件下不稳定时，化学衍生化就成为必要。
④未知物的鉴定
在比较色谱行为的基础上，比较双波长或多波长同时检测未知物和标准品的响应比，从而鉴定未知物。此法已成功地用于巴比妥类、维素C、生物碱、激素及黄酮等多种化合物的鉴定。进一步比较未知物和标准品的紫外吸收光谱可确保鉴定结果可靠准确。。应予注意的是必须选用多种分离和检测条件才能避免HPLC难以分离、检测响应极为相近的化合物互相干扰。同时，在比较色谱行为的同时比较不同的两种检测响应也是有效的鉴定方法。此外，利用衍生物的理化性质鉴定未知物，在HPLC分析中也得到了应用。
（2）HPLC优缺点
优点：分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，操作自动化，应用范围广；与气相色谱法相比，不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广；流动相种类多，可通过流动相的优化达到高的分离效率；一般在啊室温下分析即可，不需高柱温。
缺点：分析成本高，分析时间一般比气相长，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。