（1）必须含有允许外源DNA片断组入的合适位点。并且这样的克隆位点应尽可能的多。
（2）克隆载体应能携带外源基因进入受体细胞，或能在受体细胞中自我复制；或能整合到受体细胞DNA中同步复制。
（3）克隆载体必须含有供选择用的标记基因。以有利于克隆子的筛选和鉴定。
（4）克隆载体必须是安全的，不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入除受体细胞以外的其他生物的细胞，尤其是人的细胞。