问答题X 纠错
D.NA变性后原来隐藏在双螺旋内部的发色基团,成为单链而暴露出来,使DNA的物理和化学性质发生一系列的变化。这些变化包括:DNA溶液的粘度大大下降;沉淀速度增加;浮力密度上升;粘度降低;紫外吸收光谱升高;双折射现象消失,比旋下降;酸碱滴定曲线改变;生物活性丧失等。
引起DNA变性的主要因素有:温度、pH值、有机溶剂等。紫外吸收光谱的变化是检测变性最简单的定性和定量方法。
D.NA的复性必须满足二个条件:①一定的离子强度,用以削弱两条链中磷酸基团之间的排斥力。②较高的温度,用以避免随机形成的无规则氢键。
影响DNA复性速度的因素包括:
(1)DNA分子的复杂程度。
(2)DNA的浓度。
(3)DNA片段的大小。
(4)温度的影响。
(5)阳离子的浓度。
规定复性实验的标准条件是:400核苷酸长度,Tm=25℃的温度,阳离子强度0.18mol/L,此时的复性速度常数к≈5×105。
通过下列3种方法可以测定DNA序列复性的程度:
(1)S1核酸酶水解的双链DNA量。
(2)减色效应,在复性过程中可跟踪测定A260的光吸收值;
(3)S1核酸酶只催化单链DNA的水解,不能作用于双链DNA,因此将样品限定水解后测定抗羟基磷灰石层析,羟基磷灰石是一种磷酸钙盐,经过一定的处理后,具有吸附双链DNA的能力,洗脱时,只允许单链通过,从而可以计算出剩余双链DNA的量。
D.NA的Tm值大小一般与下列因素有关:
(1)DNA的均一性。
(2)G-C对含量。
(3)介质中离子强度。
以C/C0对COt作图得到的复性对浓度的依赖关系的曲线称为Cot曲线。
分子杂交有多种类型,将不同来源的DNA变性后,在溶液里进行杂交,称为溶液杂交(solutionhybridization);用硝酸纤维素制成的滤膜,可以吸附单链DNA或RNA,将变性DNA或RNA吸附到滤膜上,再进行杂交,称为滤膜杂交(filterhybridization)。滤膜杂交包括
(1)Southern印迹法用于检测DNA。
DNA变性后原来隐藏在双螺旋内部的发色基团,成为单链而暴露出来,使DNA的物理和化学性质发生一系列的变化。这些变化包括:DNA溶液的粘度大大下降;沉淀速度增加;浮力密度上升;粘度降低;紫外吸收光谱升高;双折射现象消失,比旋下降;酸碱滴定曲线改变;生物活性丧失等。
引起DNA变性的主要因素有:温度、pH值、有机溶剂等。紫外吸收光谱的变化是检测变性最简单的定性和定量方法。
DNA的复性必须满足二个条件:①一定的离子强度,用以削弱两条链中磷酸基团之间的排斥力。②较高的温度,用以避免随机形成的无规则氢键。
影响DNA复性速度的因素包括:
(1)DNA分子的复杂程度。
(2)DNA的浓度。
(3)DNA片段的大小。
(4)温度的影响。
(5)阳离子的浓度。
规定复性实验的标准条件是:400核苷酸长度,Tm=25℃的温度,阳离子强度0.18mol/L,此时的复性速度常数к≈5×105。
通过下列3种方法可以测定DNA序列复性的程度:
(1)S<sub>1</sub>核酸酶水解的双链DNA量。
(2)减色效应,在复性过程中可跟踪测定A260的光吸收值;
(3)S<sub>1</sub>核酸酶只催化单链DNA的水解,不能作用于双链DNA,因此将样品限定水解后测定抗羟基磷灰石层析,羟基磷灰石是一种磷酸钙盐,经过一定的处理后,具有吸附双链DNA的能力,洗脱时,只允许单链通过,从而可以计算出剩余双链DNA的量。
DNA的Tm值大小一般与下列因素有关:
(1)DNA的均一性。
(2)G-C对含量。
(3)介质中离子强度。
以C/C0对COt作图得到的复性对浓度的依赖关系的曲线称为Cot曲线。
分子杂交有多种类型,将不同来源的DNA变性后,在溶液里进行杂交,称为溶液杂交(solutionhybridization);用硝酸纤维素制成的滤膜,可以吸附单链DNA或RNA,将变性DNA或RNA吸附到滤膜上,再进行杂交,称为滤膜杂交(filterhybridization)。滤膜杂交包括
(1)Southern印迹法用于检测DNA。
(2)Northern印迹法用于检测RNA。
(3)Westhern印迹法用于检测蛋白质。
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